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非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒說明書
更新時間:2019-09-26   點擊次數(shù):1736次

FT-ZWSJ非洲豬瘟熒光定量PCR檢測試劑盒,已成功列入農(nóng)業(yè)農(nóng)村中國動物疫病預(yù)防控制中心

FT-ZWSJ非洲豬瘟熒光定量PCR檢測試劑盒

【獸藥名稱】

通用名稱:非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒

商品名稱:無

漢語拼音:Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

英文名稱:Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

【主要成分與含量

作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結(jié)、脾臟等樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

用法與判定

1 用法

1.1 樣品處理及模板準備

1.1.1 樣品處理

·組織樣品處理:分別從豬肉組織、淋巴結(jié)、脾臟不同位置取樣,用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨,加入1.5ml生理鹽水繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5ml無菌離心管,12000 r/min離心2分鐘,取上清200μl備用。

·血液樣品無需處理,取200μl備用。

1.1.2 模板準備

·根據(jù)不同的樣本類型,按照下表準備相應(yīng)的樣本用量。

·將樣本加入到1.5 ml離心管中,加入下表推薦體積的Solution A,渦旋震蕩20 s,并按照下表推薦的處理方法,室溫靜置3-5 min,或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。

·樣本充分裂解后(95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復(fù)室溫),加入下表推薦體積的Solution B,并渦旋震蕩30 s,12000rpm離心2min,上清即為模板DNA。

·處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗,請于4℃保存,如不能立即進行下一步試驗,請于-20℃保存。

備注:組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后,可按照血液樣本的處理方法進行處理。

1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應(yīng),效果更佳

1.2 熒光PCR擴增

1.2.1 試劑準備

實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復(fù)至室溫,使其*融化,充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體。

1.2.2 配制反應(yīng)體系

2 判定

2.1 合理調(diào)整閾值線,不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。

2.2 試劑盒有效性判定

·陰性對照:無Ct值,線形為直線或微斜,無明顯指數(shù)增長。

·陽性對照:Ct值≤30,有明顯指數(shù)增長,呈典型的S型曲線。

2.3 樣本結(jié)果判定

·樣本檢測結(jié)果Ct值≤38,有明顯指數(shù)增長,判定為陽性,表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。

·樣本檢測結(jié)果38<Ct≤40,判定為可疑。應(yīng)對樣本進行復(fù)測,若復(fù)測結(jié)果Ct值仍在38~40之間,有明顯指數(shù)增長,則判定為陽性,否則為陰性。

·樣本檢測結(jié)果無Ct值,判定為陰性,表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。

FT-ZWSJ非洲豬瘟試劑盒實拍

注意事項

(1)實驗前請仔細閱讀本試劑盒說明書,嚴格按步驟執(zhí)行,不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

(2)所有試劑應(yīng)在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應(yīng)充分混勻。試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

(3)實驗操作應(yīng)按照國家有關(guān)臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行,實驗過程應(yīng)分區(qū)(試劑準備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū)),各區(qū)物品為,不得交叉使用,避免污染。

(4)操作臺、移液器、離心機等儀器用品應(yīng)經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應(yīng)進行無酶處理。

(5)待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進行處理。

(6)為防止熒光干擾,應(yīng)避免使用含熒光物質(zhì)的手套,避免用手直接接觸,預(yù)防交叉污染。

(7)檢測結(jié)果為陰性,并不*代表為非感染狀態(tài),具體診斷需結(jié)合獸醫(yī)臨床。

(8)產(chǎn)生假陰性的可能原因為:待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當造成DNA降解;樣本中核酸濃度低于低檢測限;病毒待測靶基因出現(xiàn)變異;未經(jīng)驗證的其他干擾因素。

(9)產(chǎn)生假陽性的可能原因為:待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染。

規(guī)格】 50反應(yīng)/盒

貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存,有效期為12個月。

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